测定前应须知：
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20一25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回28℃。
3、在LISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是LISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
具体操作：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温(20~25℃)平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入白封袋，保存于28℃。
3、洗涤作液在使用前也需回温。
4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。
5、加标准品/样品：加标准品/样品5041/孔到对应的微孔中，然后加入抗试剂5041/孔，轻轻振荡混，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30mn。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μ1/孔，充分洗涤45次，每次间隔10s,用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的**头戳破）。
7、加酶标物：加入酶标物100μ1/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min,取出重复洗板步骤6。
8、显色：加入底物液A液50μ1/孔，再加底物液B液50μ1/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15~20min。
9、测定：加入终止液50μ1/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450m处（建议用双波长450/630m检测，请在5min内读完数据)，测定每孔0D值。（若无酶标仪，则不加终止液用日测法可进行判定)。
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