LLC-LUC

LLC-LUC(小鼠Lewis肺癌细胞)产品基本信息：

细胞名称：LLC-LUC(小鼠Lewis肺癌细胞)

种属来源：小鼠

组织来源：肺

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：半贴壁生长

培养基:：90% DMEM+10% FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

注：该细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中可不用再添加puro，如若担心抗性随着传代时间降低，可定期用0.5ug/ml浓度puro维持。

细胞培养操作：

1) 复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、收集细胞培养上清：抽出瓶中的培养基和悬浮的细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清，细胞重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基)。

b、剩下贴壁的细胞，用不含钙、镁离子的PBS轻轻润洗细胞1次。

c、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -2min(视细胞情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

d、按3mL/瓶补加培养基，轻轻打匀吹下细胞后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

e、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养中。(传代建议一个满的T25传一个10cm或者2个T25)。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心5 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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